Анализ изображений uPath
HER2 Dual ISH для справочника
по алгоритму анализа тканей
молочной железы
Оглавление
Введение 1
Краткий обзор и разъяснение алгоритма 2
Клиническая значимость 3
Целевое применение 4
Целевое применение продукта 4
Назначение справочника по алгоритму 4
Принципы метода 5
Ограничения 6
Характеристики сети 7
Безопасность данных 8
Рабочий процесс использования алгоритма uPath HER2 Dual ISH 9
Рабочий процесс патоморфолога 11
Характеристики окрашивания 20
Функциональные характеристики 32
Сравнение методов 32
Исследования воспроизводимости результатов патоморфологов 33
Исследования воспроизводимости результатов сканеров 34
Поиск и устранение неисправностей 35
Библиографический список 39
Введение
Пакет Roche uPath enterprise software (uPath enterprise
software) с функцией анализа изображений uPath HER2
Dual ISH для алгоритма анализа тканей молочной железы
(алгоритма uPath HER2 Dual ISH) представляет собой
программное обеспечение, разработанное для содействия
при количественной оценке статуса гена HER2 методом
двухцветной хромогенной гибридизации in situ (ISH) в
фиксированных формалином в парафине (FFPE) образцах
нормальных и неопластических тканей.
Пакет uPath enterprise software— это комплексное цифровое
программное решение для изучения патологий, которое
позволяет патоморфологическим лабораториям получать,
обрабатывать, просматривать, анализировать, совместно
использовать и представлять отчеты по цифровым
изображениям образцов тканей с патологией. С помощью
пакета uPath enterprise software патоморфолог может
просматривать цифровые изображения в разных масштабах,
добавлять примечания, выполнять измерения срезов тканей,
проводить анализ изображений и составлять отчеты.
ПРИМЕЧАНИЕ. Алгоритм uPath HER2 Dual ISH представляет
собой вспомогательный компьютеризованный метод,
содействующий при получении и измерении изображений
предметных стекол образцов тканей, окрашенных с помощью
ISH, для определения статуса гена HER2. Чтобы обеспечить
обоснованность результатов анализа изображений,
патоморфолог должен подтвердить согласование за
счет применения соответствующих контролей, согласно
указаниям в маршрутной карте VENTANA HER2 Dual ISH DNA
Probe Cocktail (VENTANA HER2 Dual ISH) (размещено на сайте
dialog.roche.com).
1 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Краткий обзор и разъяснение алгоритма
Для областей применения анализа изображений
патоморфолог может использовать пакет uPath enterprise
software для выбора и выделения одной или двух (при
необходимости) областей исследования (ОИ) с помощью
инструмента Quick ROI (Быстрая ОИ). Каждую ОИ можно
просматривать в разных масштабах, а затем проводить их
анализ с помощью алгоритма uPath HER2 Dual ISH. Карта
интенсивности показывает патоморфологу области, в
которых, по данным определения с помощью алгоритма,
наблюдается активное усиление сигналов HER2.
Когда патоморфолог строит ОИ с помощью инструмента
Quick ROI (Быстрая ОИ) (инструмент Quick ROI [Быстрая
ОИ] обязательно следует использовать для выполнения
анализа) алгоритм uPath HER2 Dual ISH сначала выявляет
20характерных опухолевых клеток. Клетки ранжируются по
следующим параметрам: размер клетки, наличие хотя бы
одного сигнала HER2 и одного сигнала Chr17, а также степень
достоверности сегментации. Вычисляется общее количество
сигналов HER2 и Chr17 для 20характерных опухолевых
клеток. С помощью количественного определения сигналов
HER2 и Chr17 алгоритм uPath HER2 Dual ISH вычисляет
соотношение HER2/Chr17. Патоморфолог может одобрить
выбранные клетки и показатели, представленные
алгоритмом uPath HER2 Dual ISH, либо может вручную
заменить клетки и подставить другие показатели вместо
предложенных. Патоморфолог также может удалить
исходную ОИ, заменив ее на новую, построенную на более
подходящей области ткани.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH не производит
самостоятельную интерпретацию данных и поэтому
подлежит использованию квалифицированным
патоморфологом в сочетании с гистологическим
исследованием, надлежащими клиническими данными и
соответствующими контролями. Он разработан и показан к
применению патоморфологом в качестве вспомогательного
средства при оценке статуса гена HER2.
2 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Клиническая значимость
Рак молочной железы— наиболее распространенный
вид карциномы, развивающийся у женщин, и вторая из
основных причин смерти от онкологических заболеваний.
Общий прогноз можно существенно улучшить за счет
раннего выявления и применения соответствующих методов
лечения.
1
Несмотря на тот факт, что экспрессия белков
может быть различной в зависимости от подтипа карциномы
молочной железы, онкобелок c-erbB-2 (HER2) является
значимым маркером при раке молочной железы. HER2
представляет собой трансмембранный белок, встроенный
в клеточную мембрану. Его экспрессия при карциноме
молочной железы происходит на различных уровнях и с
различными профилями экспрессии.
Будучи тесно связанным с рецептором эпидермального
фактора роста, он обладает тирозинкиназной активностью,
что дает основание предполагать его возможное участие в
передаче сигнала и стимуляции митогенной активности.
2
Ген HER2, у людей расположенный на Chr17, кодирует белок
HER2. Сверхэкспрессия белка HER2, амплификация гена
HER2 или оба этих явления наблюдаются приблизительно
в 15–25% случаев рака молочной железы и обусловлены
агрессивным характером развития опухоли.
3–7
Гибридизацию in situ можно использовать для выявления
амплификации гена HER2 при инвазивной карциноме
молочной железы, что делает ее эффективным инструментом
патоморфологов при постановке диагноза и определения
прогноза для карцином. Тест VENTANA HER2 Dual ISH
предназначен для применения в лаборатории с целью
количественного выявления и определения гена HER2 в
срезах фиксированных формалином в парафине нормальных
и неопластических тканях. Преимуществом гистологических
препаратов тканей является тот факт, что интактные ткани
позволяют использовать возможности морфологии при
интерпретации положительного результата анализа образца
пациента на HER2. Интерпретацию всех гистологических
исследований должен выполнять специалист в области
морфологии и/или патоморфологии рака молочной железы.
Результаты должны быть подкреплены морфологическими
исследованиями и соответствующими контролями; при этом
их следует использовать вместе с другими клиническими и
лабораторными данными.
3 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Целевое применение продукта
Функция анализа изображений uPath HER2 Dual ISH для
алгоритма анализа тканей молочной железы предназначена
для применения патоморфологами в качестве
вспомогательного средства при определении статуса
гена HER2 путем определения соотношения гена HER2 к
хромосоме17 в фиксированных формалином в парафине
образцах неопластических тканей молочной железы. При
использовании с тестом VENTANA HER2 Dual ISH Assay она
предназначена для применения в качестве вспомогательного
средства при оценке состояния пациентов с раком молочной
железы, для которых рассматривается вариант лечения
препаратом Herceptin
®
(трастузумаб).
Примечание. Функция анализа изображений uPath HER2
Dual ISH для алгоритма анализа тканей молочной железы
представляет собой вспомогательный компьютеризованный
метод, содействующий при получении и измерении
изображений предметных стекол с образцами тканей,
подвергнутых обработке методом цветной хромогенной
гибридизации in situ (ISH), для определения статуса гена
HER2. Чтобы обеспечить обоснованность результатов
анализа изображений, патоморфолог должен подтвердить
согласование за счет применения соответствующих
контролей, согласно указаниям в маршрутной карте теста
VENTANA HER2 Dual ISH Assay (PN 1018383EN).
Данный алгоритм предназначен для применения при
диагностике in vitro (IVD).
Целевое применение
Назначение справочника по алгоритму
Данный справочник по алгоритму uPath HER2 Dual ISH
(справочник по алгоритму) предназначен для выполнения
следующих задач:
• Предоставление основных сведений о целевом
применении алгоритма uPath HER2 Dual ISH, а также о
принципах и ограничениях метода.
• Обозначение необходимых материалов, требований к ИТ,
безопасности данных и сети.
• Представление пошаговых инструкций по выполнению
алгоритма uPath HER2 Dual ISH.
• Представление фотографий, иллюстрирующих порядок
применения алгоритма uPath HER2 Dual ISH.
• Предоставление патоморфологам инструмента,
помогающего в применении алгоритма uPath HER2 Dual
ISH на FFPE срезах тканей молочной железы, окрашенных
с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH.
• Представление изображений с примерами сложных
случаев, чтобы показать, как использовать алгоритм
uPath HER2 Dual ISH для их оценки.
• Представление функциональных характеристик
алгоритма uPath HER2 Dual ISH.
4 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Принципы метода
Алгоритм количественной оценки для теста VENTANA
HER2 Dual ISH:
В тесте VENTANA HER2 Dual ISH DNA для определения
соотношения HER2/Chr17 используется алгоритм
количественной оценки. Алгоритм uPath HER2 Dual ISH был
разработан с соблюдением алгоритма количественной
оценки VENTANA HER2 Dual ISH (представлен далее) и
рабочего процесса, подробно описанного в маршрутной
карте теста VENTANA HER2 Dual ISH.
Пакет uPath enterprise software с алгоритмом uPath HER2
Dual ISH использует методики анализа изображений для
определения статуса гена HER2.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH использует предварительно
заданные параметры для оценки изображений тканей,
окрашенных с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH.
Этапы проведения анализа изображений:
• Выявление клеток по всему изображению.
• Определение клеток, пригодных для подсчета, и выбор
20характерных опухолевых клеток по следующим
параметрам: размер клетки, число красных и черных
сигналов, а также степень достоверности сегментации.
• Вычисление статуса гена HER2 путем деления общего
числа сигналов HER2 на общее число сигналов Chr17 в
соответствии с маршрутной картой теста VENTANA HER2
Dual ISH.
Как алгоритм uPath HER2 Dual ISH выявляет опухолевые
клетки, и как вычисляются показатели?
• Алгоритм uPath HER2 Dual ISH выявляет опухолевые
клетки, используя цвет, интенсивность, размер и
морфологические характеристики.
• Выявленные опухолевые клетки разделяют с помощью
предварительно заданных пороговых значений,
соответствующих маршрутной карте теста VENTANA
HER2 Dual ISH.
• Для вычисления статуса гена HER2 алгоритм uPath
HER2 Dual ISH определяет число выявленных сигналов
HER2 (черный цвет) и Chr17 (красный цвет) и формирует
соотношение HER2/Chr17 в соответствии с маршрутной
картой теста VENTANA HER2 Dual ISH.
Расчет соотношения HER2/Chr17 путем
деления
общего числа сигналов HER2
из целевой области1 на общее число
сигналов Chr17 из целевой области1
Подсчет сигналов HER2 и Chr17
в 20ядрах
Определить и выбрать целевую
область
Подсчет
дополнительных
20ядер
Регистрация
результатов
Без усиления
HER2/Chr17<2,0
С усилением
HER2/Chr17≥2,0
Расчет соотношения HER2/Chr17
путем деления общего числа
сигналов HER2 из целевых
областей1 и 2 на общее
число сигналов Chr17
из целевых областей1 и 2
Не соответствует
Пуск
HER2/Chr17
окрашенный
микропрепарат
Микропрепарат
соответствует
требованиям?
Находится ли
HER2/Chr17
в диапазоне 1,8–2,2?
Да
Да
Нет
Нет
5 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH разработан для работы с
тестом VENTANA HER2 Dual ISH. Результаты исследования
фактически соответствуют качеству и точности предметного
стекла ISH, изображение которого получают, и полученного в
результате изображения, которое анализируют.
Патоморфолог должен валидировать окрашивание в
рамках теста VENTANA HER2 Dual ISH путем изучения
предметного стекла в пакете uPath enterprise software,
используя внутренние контроли, чтобы подтвердить
получение ожидаемых результатов до выполнения анализа
изображений предметных стекол.
Используйте рекомендации производителя к тесту VENTANA
HER2 Dual ISH, в том числе применяя все материалы для
положительного и отрицательного контроля качества в ходе
каждого цикла окрашивания. Если внутренние контроли
не отвечают требованиям, повторите окрашивание ткани с
приемлемыми результатами.
Патоморфолог должен следовать рекомендациям по
интерпретации результатов теста VENTANA HER2 Dual ISH.
См.маршрутную карту (P/N1018383EN) и руководство по
интерпретации (P/N1018386EN) теста VENTANA HER2 Dual
ISH (размещено на сайте dialog.roche.com).
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH разработан для применения
квалифицированным патоморфологом в сочетании
с гистологическим исследованием, надлежащими
клиническими данными и соответствующими контролями.
Он не подходит для применения в качестве самостоятельного
инструмента и требует участия компетентного специалиста в
процессе анализа.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH может генерировать
неправильные показатели при наличии отклонений в
окрашивании на полученных изображениях (окрашивание
нецелевой области, избыточное контр-окрашивание и т.п.).
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH может отбраковать
продолговатые ядра опухолевых клеток, несмотря на
общую форму клетки. По этой причине опухоли с большим
числом клеток с продолговатыми ядрами могут потребовать
проведения оценки вручную.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH отрабатывали, разрабатывали
и валидировали на образцах тканей инвазивной карциномы.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH не проверяли на работу
на персональном компьютере (PC) из дома; также при
этих условиях не валидировали его безопасность и
эффективность.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH может неправильно
определить лимфоциты как опухолевые клетки.
Патоморфологу следует визуально тщательно проверить
ткани и, по возможности, избегать тех областей, где
иммуноциты составляют более 30% всех клеток.
Алгоритм uPath HER2 Dual ISH предназначен для применения
в качестве вспомогательного средства при выявлении
пациентов, нуждающихся в лечении препаратом Herceptin,
по данным амплификации гена HER2 в соответствии с
утвержденной инструкцией по применению лекарственного
препарата.
Ограничения
6 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Характеристики сети
Между пакетом uPath enterprise software и системой управления изображениями (IMS) рекомендуется использовать сетевое
подключение со скоростью 1Гбит/с.
Таблица1. Спецификации сервера анализа изображений Roche uPath для небольших лабораторий.
Параметр Характеристики
Процессор ЦП с частотой 3,6ГГц
Количество ядер 4
ОЗУ 6×8Гб (48Гб)
Гиперпотоковая обработка Отключена
Винчестер 240Гб, SSD
Операционная система Microsoft Windows Server 2016
Поддержка виртуальных машин (VM) Да
Дополнительная информация о VM Производительность до физических серверов будет другой из-за непроизводительных
потерь VM.
Антивирус Symantec Endpoint Protection версии12
Электропитание 110/220В, 800Вт (2)
Порты 2USB, адаптер HPE Ethernet на 10/25Гб
Источник бесперебойного питания Рекомендуется
Таблица2. Спецификации сервера анализа изображений Roche uPath для средних и крупных лабораторий.
Параметр Характеристики
Процессор ЦП с частотой 3,6ГГц (2процессора)
Количество ядер 8 на процессор/16 всего
ОЗУ 12×8Гб (96Гб)
Гиперпотоковая обработка Отключена
Винчестер 240Гб, SSD (2шт.)
Операционная система Microsoft Windows Server 2016
Поддержка виртуальных машин (VM) Да
Дополнительная информация о VM Производительность до физических серверов будет другой из-за непроизводительных
потерь VM.
Антивирус Symantec Endpoint Protection версии12
Электропитание 110/220В, 800Вт (2)
Порты 2USB, адаптер HPE Ethernet на 10/25Гб
Источник бесперебойного питания Рекомендуется
7 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Вредоносное программное обеспечение или
несанкционированный доступ к прибору могут стать
причиной потери данных или невозможности использования
прибора.
Чтобы предотвратить заражение прибора вредоносным
программным обеспечением или несанкционированный
доступ и ненадлежащее использование прибора, важно
следовать приведенным далее рекомендациям:
• Запрещается устанавливать или запускать на приборе
другое программное обеспечение.
• Следует обеспечить надлежащую безопасность
и защиту других компьютеров и оборудования в
сети от вредоносного программного обеспечения и
несанкционированного доступа. Например, это относится
к лабораторной информационной системе (ЛИС), общему
архивному хранилищу, общему резервному хранилищу
или службам.
• Заказчики несут ответственность за безопасность
собственной локальной вычислительной сети, в
частности, за ее защиту от вредоносного программного
обеспечения и атак. Эта защита может включать такие
меры, как, например, межсетевой экран, для отделения
устройства от неконтролируемых сетей. К такой
защите также могут относится меры, направленные
на обеспечение отсутствия вредоносного кода в
подключенной сети.
• Следует ограничить непосредственный доступ к
прибору и ко всем подключенным к нему элементам
инфраструктуры ИТ (компьютерам, кабелям, сетевому
оборудованию и т.п.).
• Следует обеспечить защиту файлов резервных копий
и архивов прибора от несанкционированного доступа
и чрезвычайных происшествий. В этот список следует
включить место удаленного хранилища, узлы аварийного
восстановления и безопасный перенос файлов
резервных копий.
• По возможности, для ограничения сетевого трафика
следует использовать межсетевой экран.
• Для некоторых видов резервного копирования и
восстановления можно использовать флеш-накопители
USB. Ненадлежащее обращение с флеш-накопителем
USB может привести к потере данных или неисправности
прибора.
Безопасность данных
• Используйте только те флеш-накопители USB, которые
были проверены и установлены сотрудником местной
службы поддержки компании Roche.
• В любой отдельно взятый момент времени можно
использовать только одно USB-устройство. Прежде чем
подключить к прибору флеш-накопитель USB, убедитесь в
отсутствии другого установленного в него USB-устройства.
• Прежде чем извлечь флеш-накопитель USB, нажмите
кнопку «Извлечь» в Windows.
• Конфигурацию операционной системы (ОС) по
умолчанию, предлагаемую вместе с сервером, нельзя
изменять, поскольку это отразится на параметрах
отказоустойчивости конфигурации ОС.
• Чтобы предотвратить заражение пакета uPath enterprise
software вирусом, используйте флеш-накопитель USB
только с данным прибором. Не храните на этом флеш-
накопителе USB другие данные.
8 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Рабочий процесс использования алгоритма uPath HER2 Dual ISH
Предоставляемые материалы
• Алгоритм uPath HER2 Dual ISH
Материалы, которые необходимы, но не входят в комплект поставки
• Пакет uPath enterprise software
• Предметные стекла с образцами ткани молочной железы, окрашенные с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH (с
использованием наборов для детектирования VENTANA Silver ISH DNP и VENTANA Red ISH DIG) на приборе BenchMark ULTRA
• Сканер микропрепаратов VENTANA DP200
Особые указания и меры предосторожности
1. Только для диагностики in vitro (IVD).
2. Только для профессионального применения.
3. ВНИМАНИЕ! Федеральное законодательство США разрешает продажу этого устройства только врачу или по заказу
врача. (Rx only)
4. Чтобы сообщить о подозрении на серьезное происшествие в связи с данным устройством, обратитесь к местному
представителю компании Roche, а также в компетентные органы государства-участника ЕС или страны, в которой
зарегистрирован пользователь.
Рабочий процесс
1. Образец ткани молочной железы на предметном стекле окрашивают с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH на
приборе BenchMark ULTRA.
2. Изображение (сканирование микропрепарата целиком) получают с помощью сканера микропрепаратов VENTANA DP200
при 40-кратном увеличении в одной плоскостиZ.
3. После получения цифровых изображений их переносят с компьютера, связанного со сканером микропрепаратов
VENTANA DP200, в систему управления изображениями (IMS) на централизованном сервере.
4. После переноса на сервер в пакете uPath enterprise software создается карта данных. Создание карты данных
происходит автоматически при обмене данными с лабораторной информационной системой (ЛИС) с использованием
идентификационной информации (например, тип ткани и тест), которая указана на этикетке со штрих-кодом
предметного стекла или была введена вручную в пакет uPath enterprise software (см.руководство пользователя uPath
enterprise software [PN 1018943EN]).
5. Если алгоритм uPath HER2 Dual ISH установлен (а он должен быть установлен на отдельном от пакета uPath enterprise
software и IMS сервере), а изображение с 40-кратным увеличением зарегистрировано с соответствующим окрашиванием
и типом ткани, пакет uPath enterprise software автоматически запустит анализ микропрепарата целиком (WSA).
6. WSA автоматически анализирует все отсканированное изображение.
7. По завершении WSA программное обеспечение выведет для патоморфолога уведомление, что «analysis is complete»
(анализ выполнен).
8. После оценки изображения патоморфолог сможет переключить карту интенсивности, на которой будут выделены
области, подходящие для оценки показателей по наличию сигналов HER2.
9. После определения подходящей области патоморфолог может выбрать ОИ с помощью инструмента Quick ROI (Быстрая
ОИ), который автоматически формирует квадрат размером 0,4мм×0,4мм для оценки 20характерных опухолевых клеток,
выбранных алгоритмом uPath HER2 Dual ISH по следующим параметрам: размер клетки, число сигналов HER2 и Chr17, а
9 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
также степень достоверности сегментации. Если патоморфолог не согласен с выбором клеток, он может удалять и добавлять
клетки, выбирая их на панели ROI Details (Характеристики ОИ) или внутри ОИ. Патоморфолог также может удалить исходную
ОИ, заменив ее на новую, построенную на более подходящей области ткани.
10. Если соотношение HER2/Chr17 находится в диапазоне от 1,8 до 2,2, патоморфолог сможет использовать инструмент
Quick ROI (Быстрая ОИ) для построения второй ОИ и анализа второго набора из 20клеток в соответствии с маршрутной
картой теста VENTANA HER2 Dual ISH. Однако если показатель для первой ОИ < 1,8 или > 2,2, инструмент Quick ROI
(Быстрая ОИ) будет отключен, а статус гена HER2 будет основан только на данных первой ОИ. Если патоморфолог не
согласен с полученным показателем, он может вручную скорректировать данные алгоритма.
Окрашивание
• Подготовку и окрашивание тканей следует выполнять в соответствии с рекомендациями, представленными в
маршрутной карте теста VENTANA HER2 Dual ISH.
• Все соответствующие контроли необходимо проверить, и повторить окрашивание предметных стекол, если изначальное
окрашивание не соответствует рекомендациям, изложенным в маршрутной карте теста VENTANA HER2 Dual ISH.
• Перед проведением анализа для окрашивания тканей алгоритм uPath HER2 Dual ISH требует применения теста VENTANA
HER2 Dual ISH, а также всех дополнительных материалов или принадлежностей, перечисленных в маршрутной карте
теста VENTANA HER2 Dual ISH.
• Тест VENTANA HER2 Dual ISH определяет статус гена HER2 в FFPE образцах тканей молочной железы, окрашенных с
помощью наборов для детектирования VENTANA Silver ISH DNP и VENTANA Red ISH DIG на приборе BenchMark ULTRA.
Получение изображения
Для сканирования предметных стекол необходим сканер микропрепаратов VENTANA DP200. Изображения необходимо
сканировать при 40-кратном увеличении. Образцы тканей должны быть без складок и красителя. Если большие участки
изображения находятся не в фокусе, рекомендуется повторить сканирование предметных стекол. Дополнительную
информацию о сканировании см.в руководстве пользователя сканера микропрепаратов VENTANA DP200 (PN1017149RU).
Общее управление в системе: пакет uPath enterprise software
Пакет uPath enterprise software рассчитан на настройку и адаптацию под требования отдельного пользователя и учреждения,
включая (без ограничения) конфигурацию отчетности и интерфейса пользователя. Данный справочник по алгоритму
нацелен на изучение инструментов, необходимых для применения только алгоритма uPath HER2 Dual ISH. Дополнительную
информацию о пакете uPath enterprise software см.в руководстве пользователя uPath enterprise software.
10 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Рабочий процесс патоморфолога
Открытие карты данных
Доступ к изображениям ткани молочной железы, окрашенной с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH DNA, возможен при
двойном щелчке по карте данных, либо при выборе карты данных и нажатии на вкладку viewer (средство просмотра) в пакете
uPath enterprise software (рисунок1).
Появится экран со всеми изображениями, связанными с картой данных (рисунок2).
Рисунок2
Рисунок1
11 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
После сканирования предметного стекла, окрашенного с помощью теста VENTANA HER2 Dual ISH, на сканере
микропрепаратов VENTANA DP200 при 40-кратном увеличении, изображение импортируется в пакет uPath enterprise software
и соотносится с картой данных. Алгоритм uPath HER2 Dual ISH автоматически запускает WSA. Время на выполнение этапа
предварительного расчета в рамках WSA зависит от спецификаций сервера, размера изображений и количества изображений
в очереди. Когда отображается сообщение «waiting to start auto-analysis» (ожидается запуск автоматического анализа), это
означает, что изображения находятся в очереди и еще не проанализированы, а сообщение «analyzing» (выполняется анализ)
используется во время выполнения WSA (рисунки3 и4). После полного анализа изображения с помощью WSA в пакете uPath
enterprise software сообщение «analysis successful» (анализ выполнен успешно) будет выведено на экран под изображением
предметного стекла внутри средства просмотра в пакете uPath enterprise software (рисунок5). Оценка показателей
изображения невозможна до успешного выполнения WSA.
Карта интенсивности
Этап предварительного расчета в рамках WSA предусматривает формирование алгоритмом uPath HER2 Dual ISH карты
интенсивности, доступной на панели Slide Navigator (Навигатор микропрепаратов) (рисунок6). Карту интенсивности можно
включить или выключить с помощью кнопок Hide Heatmap (Скрыть карту интенсивности) и Show Heatmap (Показать карту
интенсивности) в правом нижнем углу панели Slide Navigator (Навигатор микропрепаратов) (рисунок6). Карта интенсивности
предназначена для выявления областей с усиленными сигналами HER2, которые считаются оптимальными для оценки
показателей на основании и в соответствии с руководством по интерпретации теста VENTANA HER2 Dual ISH. Она меняется в
диапазоне от желтого (нижний предел соотношения HER2/Chr17) до красного цвета (верхний предел соотношения HER2/Chr17).
Никакого наложения не будет в тех областях (и картах данных), где алгоритм не обнаружил усиления. Несмотря на данные,
показанные в карте интенсивности, патоморфологу следует проверить изображений так же, как при считывании вручную.
Рисунок5
Рисунок3
Рисунок4
Рисунок6
ПРИМЕЧАНИЕ. В данном примере у большой части образца ткани высокий показатель соотношения HER2/Chr17,
что показано в виде областей темно-красного цвета на карте интенсивности.
12 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Наложение клеток, пригодных для подсчета
Наложение, выделяющее клетки, пригодные для подсчета, красным цветом, появляется при увеличении масштаба
изображения в 20 или более раз (рисунок7). Алгоритм uPath HER2 Dual ISH выбирает клетки, пригодные для подсчета,
по следующим критериям: размер, наличие хотя бы одного сигнала HER2 и одного сигнала Chr17, а также степень
достоверности сегментации (клетка четко отделяется от соседних клеток). Если любой из трех критериев не выполнен,
клетка будет считаться непригодной для подсчета, и наложение не появится. Наложение выявляет клетки, пригодные для
подсчета, позволяя пользователю определять области с достаточным количеством таких опухолевых клеток.
После проверки изображения и определения области исследования (область опухолевых клеток и соответствующих клеток
для внутреннего контроля окрашивания) используйте инструмент Quick ROI (Быстрая ОИ) для запуска анализа (рисунок8).
Рисунок7
Рисунок8
13 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
После выбора инструмента Quick ROI (Быстрая ОИ) произойдет следующее:
1. Появится ОИ размером 0,4мм×0,4мм, расположенная по центру средства просмотра (рисунок9).
2. Наложение всех клеток, пригодных для подсчета, пропадет с ОИ.
3. Появится наложение красного цвета, выделяющее 20характерных опухолевых клеток, которые были выбраны
алгоритмом uPath HER2 Dual ISH в пределах данной ОИ (рисунок9).
4. Количество HER2 и Chr17 для каждой клетки в пределах ОИ появится внутри выпадающей панели ROI Details
(Характеристики ОИ) (рисунок10).
5. Соотношение HER2/Chr17, общее число сигналов HER2 и общее число сигналов Chr17 будут вычислены и выведены на
экран внутри выпадающей панели ROI Details (Характеристики ОИ) (рисунок10). Панель ROI Details (Характеристики ОИ)
можно включить нажатием на значок раскрытия (рисунок11).
Рисунок11Рисунок9 Рисунок10
14 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Патоморфологи могут выбрать одну из 20характерных опухолевых клеток с красным наложением, чтобы вывести на экран
соответствующее число сигналов HER2 и Chr17 в пределах этой клетки в соответствии с определением, выполненными
алгоритмом uPath HER2 Dual ISH.
Теперь клетка будет обведена зеленым цветом, а соответствующее количество сигналов будет выделено синим цветом на
выпадающей панели ROI Details (Характеристики ОИ) (рисунок12). И наоборот, выбор одной из 20клеток в списке Cell
Count (Число клеток) на выпадающей панели ROI Details (Характеристики ОИ) приведет к выделению соответствующей
клетки зеленым цветом.
Рисунок12
15 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Quick ROI (Быстрая ОИ): Удаление
Если выбранная ОИ не является оптимальной, ее можно удалить. Выберите инструмент Quick ROI (Быстрая ОИ), щелкнув
по любой точке ОИ, а затем выберите значок Delete (Удалить) внутри Slide Panel (Панель микропрепарата) (рисунок13)
или внутри изображения предметного стекла рядом с ОИ (рисунок14). На экране появится окно подтверждения. Выберите
Confirm (Подтвердить), чтобы удалить выбранную ОИ. Выберите Cancel (Отмена), чтобы оставить ОИ.
Quick ROI (Быстрая ОИ): Замена клеток
Если выбранная клетка (или клетки), определенные алгоритмом uPath HER2 Dual ISH, не соответствуют рекомендациям,
изложенным в маршрутной карте теста VENTANA HER2 Dual ISH, выберите клетку, щелкнув по центру клетки или выбрав
клетку из списка Cell Count (Число клеток). Удалите клетку, выбрав значок Delete (Удалить) внутри выпадающей панели
ROI Details (Характеристики ОИ) над кнопкой Confirm (Подтвердить) (рисунок15). После выбора значка Delete (Удалить)
количество клеток HER2 и Chr17 будет удалено из списка клеток, а соответствующая выделенная клетка будет удалена с ОИ
(ряд8 на рисунке16). После этого станет активным значок Add (Добавить) (рисунок16). Выберите кнопку Add (Добавить) и
обведите новую клетку, которую необходимо оценить.
Рисунок14
Рисунок13
Рисунок15
Рисунок16
16 Анализ изображений uPath HER2 Dual ISH для справочника по алгоритму анализа тканей молочной железы
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
Страница загружается ...
-
1
-
2
-
3
-
4
-
5
-
6
-
7
-
8
-
9
-
10
-
11
-
12
-
13
-
14
-
15
-
16
-
17
-
18
-
19
-
20
-
21
-
22
-
23
-
24
-
25
-
26
-
27
-
28
-
29
-
30
-
31
-
32
-
33
-
34
-
35
-
36
-
37
-
38
-
39
-
40
-
41
-
42
-
43
-
44
